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Gibco胎牛血清使用中的常见问题
点击次数:254 发布时间:2019-04-23
   Gibco胎牛血清使用中的常见问题
  1、 如何储存和解冻Gibco胎牛血清才不会使产品质量受损?
  将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。
  长时间储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此,推荐在-20℃以下储存血清,并避免反复冻融。
  我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时,请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。
  2、血清中包含絮状沉淀,它们是什么,怎么处理?
  沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性,不会影响产品性质。要除去沉淀,离心血清(400g,1-2分钟)或者简单的让其沉淀在瓶子底部,将血清小心的转移到另一个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀,因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以,使用产品时要摇动并加热血清至37℃,沉淀会自然消失。
  3、实验室如何选择适合的血清?
  国内一致认为HYCLONE的血清是zui好的,但是根据我在北美的经历,国外一般认为GIBCO比HYCLONE好,所以并不是价格决定质量,但是总的来说这两种价格普遍偏贵,一般不是太娇气的细胞,国产的就够用了。此外,由于国内HYCLONE,GIBCO并没有生产线,我们只能从代理商那里买,而代理商又鱼龙混杂,所以买到假货的可能性也很大。所以,我一般会从直销员那里买血清,有的国外生物公司由于刚刚进入中国,知名度不高,但是其实在国外已经做得很不错了,如Wisent等,他们在国内有办事处,我会从那里拿,血清的品质和HYCLONE不相上下,但价格相对优惠很多。
  4、 如何避免血清中产生沉淀?
  按如下操作可避免沉淀的产生:
  (1)解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。
  (2) 血清分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。
  (3) 勿直接由-20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
  (4) 勿将Gibco胎牛血清置于37℃太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏,从而影响血清的品质。
  (5) 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。
  (6) 若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。
  5、 培养基中添加了血清和抗生素后,可长期保存吗?
  一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时,您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。
  6、 为什么要热灭活血清?
  加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究,培养ES细胞、平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。
  7、 有必要做热灭活吗?
  实验显示,经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。
  若非必须,可以不需要做热处理这一步。不但节省时间,更确保血清的质量!
  8、细胞培养中出现黑点是污染吗?如何处理?
  一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成,首先,要肉眼观察培养基是否混浊,然后,在镜下观察培养细胞生长的状态,黑点是否游动。如果细胞被污染,微生物则会大量繁殖,培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。
  如果在镜下观察细胞,生长状态良好,与黑点出现前相比,没有任何变化,那么,黑点的出现可能与以下几种情况有关:
  (1)细胞生长过老,破碎的细胞残骸;
  (2)血清质量不好,反复冻融的结果;
  (3)配制培养基的pH值偏高,不宜细胞生长;
  (4)配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点;
  (5)培养原代细胞中出现小黑点,可能是原代组织中的杂质,多次传代可以消除。
  9、 细胞培养中如何防止黑点生成?
  (1) 尽可能地减少血清冻融次数。
  (2) 培养基无需37℃水浴。
  (3) 培养基保持zui佳PH值7.0- 7.2。
  (4) 严格控制配制培养基的水质,容器定期刷洗。
  (5) Gibco胎牛血清掌握细胞传代的zui佳时机,细胞切勿生长过老。
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